Agar ile Bakteri Nasıl Yetiştirilir?

Bakteri yetiştirmeden önce steril kültür kapları hazırlamanız gerekir. 125 ml’lik bir şişe besin agarı, yaklaşık 10 petri kabını doldurmaya yetecek kadar içerir.

Su Banyosu Yöntemi; Agar şişesi kapağını gevşetin ancak tamamen çıkarmayın. Agarın tamamı sıvı hale gelinceye kadar şişeyi 70-90 °C sıcaklıktaki sıcak suya yerleştirin. Şişenin devrilmesini önlemek için su seviyesini agar seviyesiyle aynı seviyede tutun.

Agar’ın Petri Kaplarına Dökülmesi

• Petri kutularına dökmeden önce agarın 40-50 °C’a soğumasını bekleyin (şişe hâlâ sıcak olduğunda ancak dokunulamayacak kadar sıcak olmadığında).
• Petri kabının kapağını, kabın içine agarı dökecek kadar kaydırarak açın. Kabın tabanının 1/2 ila 2/3’ünü (yaklaşık 10-13 ml) kaplayacak kadar agar dökün.
• Şişe ağzının tabağa değmesine izin vermeyin. Kontaminasyonu önlemek için kabı hemen kapatın ve agar tabağın tüm tabanını kaplayana kadar yavaşça ileri geri eğin.
• Petri kaplarını kullanmadan önce agarın katılaşması için bir saat bekletin.

Deney 1: Yanak Hücre Swabı

• Yukarıdaki talimatları kullanarak bir kültür kabı hazırlayın.
• Kültür kabı hazırlandıktan sonra steril bir pamuklu çubuk veya aşılama iğnesi kullanın ve yanağınızın iç kısmını sürün.
• Swabı agarın üzerine birkaç zikzak vuruşla çok nazikçe sürün ve kapağı tabağa yerleştirin.
• Bakteri büyümesi ortaya çıkmadan önce kabı 3-7 gün boyunca sıcak bir alanda bekletmeniz gerekir.
• Büyümeyi her gün bir çizim ve yazılı bir açıklama ile kaydedin.
• Bakteriler yüksek güçlü bir mikroskop olmadan görülemeyecek kadar küçüktür, ancak bakteri kolonilerini görebilirsiniz. Kolonilerin rengine ve şekline göre farklı bakteri türleri arasında ayrım yapın.

Deney 2: Antibakteriyel Ajanların Test Edilmesi

• Bir maddenin antibakteriyel etkinliğini test etmenin bir yöntemi “hassasiyet kareleri” kullanmaktır.
• Kurutma kağıdından (veya başka bir emici kağıttan) küçük kareler kesin.
• Bunları test etmek istediğiniz maddeye batırın: iyot, etil alkol, antibakteriyel sabun, antiseptikler, sarımsak vb.
• Kareleri kirletmemek için temiz cımbız kullanın.
• Bunları kalıcı mürekkeple etiketleyin.
• Bunları seçilen maddeye batırın ve fazla sıvıyı bir kağıt havluyla kurulayın.

Deney 3: Bakteri Kültürünün Aşılanması

• Bakteri toplamak için bir kaynağa karar verin. Hassasiyet karelerini kullanmak için tek bir kaynak olduğundan emin olun ve her kabın mümkün olduğunca tutarlı olmasını sağlayın. Kaynaklar arasında mutfak lavabosu, banyo tezgahı, cep telefonu veya test etmek istediğiniz başka bir yüzey bulunabilir.
• Seçilen yüzeye steril bir bez sürün.
• Zikzak deseninde hazırlanan agar kabına hafifçe sürün.
• Kabı çevirin ve tekrarlayın.

Deney 4: Zikzak Swablama Tekniği

• Bir kabı “Kontrol” olarak etiketleyin.
• Daha sonra antibakteriyel özelliklerini test etmek istediğiniz bir maddeye batırılmış hassasiyet karelerini test kabınıza cımbız kullanarak ekleyin.
• Kağıdın tek başına bakteri büyümesi üzerinde herhangi bir etkisi olup olmadığını görmek için düz bir kare kurutma kağıdı ekleyin.
• Birden fazla test kabı kullanın ve koşulların her kap için aynı olmasını sağlayacak şekilde değişkenleri kontrol edin: aynı yerden toplanan, aynı miktarda antibakteriyel maddeye maruz kalan, aynı sıcaklıkta saklanan bakteriler vb.
• Tüm kapları dolap gibi karanlık, oda sıcaklığında bir yere koyun. Petri kabında bakteri büyümesini inceleyin.

Bilgi: Ne kadar çok test yaparsanız, o kadar çok veri toplarsınız ve sonuçlarınızdan o kadar emin olursunuz.

Zikzak Swablama Tekniği

• 3-7 gün bekleyin ve kapakları çıkarmadan kaplardaki bakteri üremesini inceleyin.
• Birden fazla yuvarlak büyüme noktası göreceksiniz; bunlar bakteri kolonileridir. Bakteri örneklerinizi nerede topladığınıza bağlı olarak, kaplarınızda çeşitli bakteri türleri ve hatta bazı küfler büyüyor olabilir.
• Farklı koloni türleri farklı renk ve dokulara sahip olacaktır. Bileşik veya stereo mikroskobunuz varsa, daha fazla fark görmek için kolonilere yakından bakmayı deneyin.
• Kontrol kabındaki bakteri miktarını test kaplarındaki miktarla karşılaştırın.
• Her bir kağıt karesinin etrafındaki bakteri üreme miktarını karşılaştırın.
• Bu deneyin bir varyasyonu için, hassasiyet kareleri kullanmak yerine sıcaklığın bakteri büyümesi üzerindeki etkisini test edin. Kontrol tabağını oda sıcaklığına koyun ve diğer tabakları farklı sıcaklıklara sahip karanlık alanlara yerleştirin.

Deney Sonu Düşünülmesi Gerekenler

• Hangisinin yakınında bakteri büyüyor?
• Hangisinin yakınında en az bakteri çoğalıyor?
• Birden fazla test kabı hazırladıysanız sonuçlar tüm test kaplarında benzer mi? Değilse, sizce sonuçların farklı olmasına hangi değişkenler neden olmuş olabilir?
• Bu, sonuçlarınızı nasıl etkiliyor?